Yay Elmi Bələdçisi: 40°C İstilik Dalğası Molekulyar Təcrübələrlə Qarşılaşdıqda

Son zamanlar Çinin əksər hissəsində yüksək temperatur davam edir. İyulun 24-də Şandun Əyalət Meteoroloji Rəsədxanası daxili ərazilərdə növbəti dörd gün ərzində 35-37°C (111-133°F) və 80% rütubətin "saunaya bənzər" temperatur olacağını proqnozlaşdıran sarı yüksək temperatur xəbərdarlığı verib. Turpan, Sincan kimi yerlərdə temperatur 48°C-yə (111-133°F) yaxınlaşır. Wuhan və Xiaogan, Hubei, bəzi ərazilərdə temperatur 37 ° C-dən çox olan narıncı xəbərdarlıq altındadır. Bu qızmar istidə pipetlərin səthinin altındakı mikroskopik dünya qeyri-adi pozğunluqları yaşayır - nuklein turşularının sabitliyi, fermentlərin fəaliyyəti və reagentlərin fiziki vəziyyəti istilik dalğası ilə sakitcə pozulur.

Nuklein turşusunun çıxarılması zamanla yarışa çevrildi. Xarici havanın temperaturu 40°C-dən çox olduqda, hətta kondisioner işə salındıqda belə, əməliyyat masasının temperaturu tez-tez 28°C-dən yuxarı qalxır. Bu zaman açıq yerdə qalan RNT nümunələri yaz və payızda olduğundan iki dəfədən çox sürətlə parçalanır. Maqnit muncuq ekstraksiyasında, həlledicinin sürətlənmiş uçuculuğu səbəbindən tampon məhlulu yerli olaraq doymuş olur və kristallar asanlıqla çökür. Bu kristallar nuklein turşusunun tutulmasının səmərəliliyində böyük dalğalanmalara səbəb olacaq. Üzvi həlledicilərin uçuculuğu eyni vaxtda artır. 30°C-də xloroformun buxarlanmasının miqdarı 25°C ilə müqayisədə 40% artır. İstismar zamanı duman qapağında küləyin sürətinin 0,5 m/s olmasını təmin etmək və qoruyucu effektivliyi qorumaq üçün nitril əlcəklərdən istifadə etmək lazımdır.

PCR təcrübələri daha mürəkkəb temperatur pozuntuları ilə üzləşir. Taq fermenti və əks transkriptaza kimi reagentlər temperaturun qəfil dəyişmələrinə son dərəcə həssasdırlar. -20°C dondurucudan çıxarıldıqdan sonra borunun divarlarında kondensasiya reaksiya sisteminə daxil olarsa, ferment aktivliyinin 15%-dən çox itkisinə səbəb ola bilər. dNTP məhlulları həmçinin otaq temperaturuna (>30°C) cəmi 5 dəqiqə məruz qaldıqdan sonra aşkar edilə bilən deqradasiya göstərə bilər. Alətin işinə yüksək temperatur da mane olur. Laboratoriya mühitinin temperaturu >35°C olduqda və PCR alətinin istilik yayma klirensi qeyri-kafi olduqda (divardan <50 sm), daxili temperatur fərqi 0,8°C-ə çata bilər. Bu sapma 96 quyulu lövhənin kənarında gücləndirmə səmərəliliyinin 40%-dən çox azalmasına səbəb ola bilər. Toz filtrləri müntəzəm olaraq təmizlənməlidir (tozun yığılması istilik yayılmasının səmərəliliyini 50% azaldır) və birbaşa kondisionerdən qaçınmaq lazımdır. Bundan əlavə, bir gecədə PCR təcrübələrini həyata keçirərkən, nümunələri saxlamaq üçün PCR alətindən “müvəqqəti soyuducu” kimi istifadə etməyin. 4°C temperaturda 2 saatdan çox saxlama qızdırılan qapaq bağlandıqdan sonra kondensasiyanın yaranmasına səbəb ola bilər, reaksiya sistemini sulandırır və alətin metal modullarını korroziyaya sala bilər.

Davamlı yüksək temperatur xəbərdarlığı ilə üzləşən molekulyar laboratoriyalar da həyəcan təbili çalmalıdır. Qiymətli RNT nümunələri -80°C dondurucunun arxasında saxlanılmalıdır, giriş yüksək temperatur dövrləri ilə məhdudlaşdırılmalıdır. -20°C dondurucunun qapısını gündə beş dəfədən çox açmaq temperaturun dəyişməsini daha da gücləndirəcək. Yüksək istilik yaradan avadanlıq hər iki tərəfdə və arxa tərəfdə ən azı 50 sm istilik yayma sahəsi tələb edir. Bundan əlavə, eksperimental vaxtın yenidən qurulması tövsiyə olunur: RNT çıxarılması və qPCR yüklənməsi kimi temperatura həssas əməliyyatlar üçün 7:00-10:00; Məlumatların təhlili kimi qeyri-eksperimental iş üçün 13:00-16:00. Bu strategiya yüksək temperatur zirvələrinin kritik addımlara müdaxiləsinin qarşısını effektiv şəkildə ala bilər.

İsti dalğası zamanı molekulyar təcrübələr həm texnika, həm də səbr sınağıdır. Amansız yay günəşi altında, bəlkə də, alətin daha çox istiliyi yayması üçün pipetinizi yerə qoyub nümunələrinizə əlavə buz qutusu əlavə etməyin vaxtıdır. Temperatur dəyişkənliyinə olan bu ehtiram, qızmar yay aylarında ən qiymətli laboratoriya keyfiyyətidir – axırda yayın 40°C istisində hətta molekullar da diqqətlə qorunan “süni qütb bölgəsinə” ehtiyac duyurlar.