Yay Elmi Bələdçisi: 40°C İstilik Dalğası Molekulyar Təcrübələrlə Qarşılaşdıqda

Son zamanlar Çinin böyük bir hissəsində yüksək temperatur davam edir. 24 iyulda Şandunq Əyalət Meteorologiya Rəsədxanası sarı yüksək temperatur xəbərdarlığı yayımladı və daxili ərazilərdə növbəti dörd gün ərzində 35-37°C (111-133°F) "sauna bənzər" temperatur və 80% rütubət proqnozlaşdırdı. Sincan, Turpan kimi yerlərdə temperatur 48°C (111-133°F)-ə yaxınlaşır. Hubei, Uhan və Xiaoqan şəhərlərində narıncı xəbərdarlıq elan edilib, bəzi ərazilərdə temperatur 37°C-dən çoxdur. Bu qızmar istidə pipetlərin səthinin altındakı mikroskopik aləm qeyri-adi pozuntular yaşayır - nuklein turşularının sabitliyi, fermentlərin aktivliyi və reagentlərin fiziki vəziyyəti istilik dalğası tərəfindən sakitcə təhrif olunur.

Nuklein turşusunun çıxarılması zamanla yarışa çevrilib. Açıq hava temperaturu 40°C-dən yuxarı olduqda, hətta kondisioner işlək vəziyyətdə belə, əməliyyat masasının temperaturu çox vaxt 28°C-dən yuxarı qalxır. Bu zaman açıq havada qalan RNT nümunələri yaz və payız aylarına nisbətən iki dəfədən çox sürətlə parçalanır. Maqnit muncuqlu çıxarışda, həlledicinin sürətlənmiş buxarlanması səbəbindən bufer məhlulu lokal olaraq doyur və kristallar asanlıqla çökür. Bu kristallar nuklein turşusunun tutulma səmərəliliyində böyük dalğalanmalara səbəb olacaq. Üzvi həlledicilərin buxarlanması eyni vaxtda artır. 30°C-də xloroformun buxarlanması miqdarı 25°C ilə müqayisədə 40% artır. Əməliyyat zamanı tüstü başlığında küləyin sürətinin 0,5 m/s olmasını təmin etmək və qoruyucu effektivliyi qorumaq üçün nitril əlcəklərdən istifadə etmək lazımdır.

PCR təcrübələri daha mürəkkəb temperatur pozuntuları ilə üzləşir. Taq fermenti və tərs transkriptaza kimi reagentlər qəfil temperatur dalğalanmalarına son dərəcə həssasdır. -20°C dondurucudan çıxarıldıqdan sonra boru divarlarında yaranan kondensasiya reaksiya sisteminə daxil olarsa, 15%-dən çox ferment aktivliyinin itirilməsinə səbəb ola bilər. dNTP məhlulları otaq temperaturuna (>30°C) cəmi 5 dəqiqə məruz qaldıqdan sonra aşkar edilə bilən parçalanma göstərə bilər. Cihazın işləməsi də yüksək temperaturla çətinləşir. Laboratoriya mühitinin temperaturu >35°C olduqda və PCR cihazının istilik yayılması boşluğu qeyri-kafi olduqda (divardan <50 sm), daxili temperatur fərqi 0,8°C-yə qədər çata bilər. Bu sapma 96 quyulu lövhənin kənarında gücləndirmə səmərəliliyinin 40%-dən çox düşməsinə səbəb ola bilər. Toz filtrləri müntəzəm olaraq təmizlənməlidir (tozun yığılması istilik yayılması səmərəliliyini 50% azaldır) və birbaşa kondisionerdən çəkinmək lazımdır. Bundan əlavə, PCR təcrübələrini gecə ərzində apararkən, PCR cihazını nümunələri saxlamaq üçün "müvəqqəti soyuducu" kimi istifadə etməkdən çəkinin. 4°C-də 2 saatdan çox saxlama, qızdırılan qapaq bağlandıqdan sonra kondensasiyanın əmələ gəlməsinə səbəb ola bilər ki, bu da reaksiya sistemini durulaşdıra və cihazın metal modullarını korroziyaya uğrada bilər.

Davamlı yüksək temperatur xəbərdarlıqları ilə qarşılaşan molekulyar laboratoriyalar da həyəcan siqnalı verməlidirlər. Qiymətli RNT nümunələri -80°C dondurucunun arxasında saxlanılmalı və giriş yüksək temperatur dövrləri ilə məhdudlaşdırılmalıdır. -20°C dondurucunun qapısını gündə beş dəfədən çox açmaq temperatur dalğalanmalarını daha da artıracaq. Yüksək istilik yaradan avadanlıqların hər iki tərəfində və arxa tərəflərində ən azı 50 sm istilik yayma sahəsi tələb olunur. Bundan əlavə, təcrübə vaxtının yenidən qurulması tövsiyə olunur: RNT çıxarılması və qPCR yüklənməsi kimi temperatur həssas əməliyyatlar üçün səhər 7:00-10:00; məlumatların təhlili kimi qeyri-eksperimental işlər üçün isə günorta 13:00-16:00. Bu strategiya yüksək temperatur piklərinin vacib addımlara müdaxiləsinin qarşısını effektiv şəkildə ala bilər.

İstilik dalğası zamanı molekulyar təcrübələr həm texnikanın, həm də səbrin sınağıdır. Amansız yay günəşi altında, bəlkə də pipetinizi yerə qoyub nümunələrinizə əlavə bir qutu buz əlavə etməyin vaxtıdır ki, cihaz daha çox istiliyi yaysın. Temperatur dalğalanmalarına bu hörmət, qızmar yay aylarında ən qiymətli laboratoriya keyfiyyətidir - axı, yayın 40°C istisində hətta molekulların belə diqqətlə qorunan "süni qütb bölgəsinə" ehtiyacı var.